 |
|
 | |
|
Sexagem pelo DNA tornou-se o método preferido para a identificação do sexo nas aves monomórficas (onde machos e fêmeas não possuem diferenças visíveis). A Sexagem pelo DNA pode ser feita através de amostras de sangue e penas. Sangue de aves é uma excelente fonte de DNA e por muitos anos uma amostra de sangue foi o único meio usado para se coletar uma amostra de DNA.
No entanto, em muitos casos, entusiastas aviários descobriram que coletar uma amostra de sangue é freqüentemente inconveniente, e algumas vezes até impossível. Com os recentes avanços na tecnologia do DNA, nós agora podemos extrair o DNA necessário para se determinar o sexo a partir de somente algumas penas retiradas. Tanto sangue quanto penas são igualmente confiáveis e provêem o mesmo nível de precisão no exame. O método que você escolher depende basicamente da sua preferência.
Nossa metodologia baseia-se em uma técnica bem conhecida e muito utilizada por laboratórios de Biologia Molecular em todo o mundo. Esta técnica é chamada PCR (Reação em Cadeia pela Polimerase). O que se faz com esta técnica é trabalhar o DNA de forma que ele possa ser interpretado.
Simplificadamente, de uma molécula de DNA serão produzidas diversas cópias de locais específicos, com os quais se pretende trabalhar. A partir de um pedaço de material vivo do organismo a ser estudado, é extraído seu DNA. Este material pode ser uma pena, um pêlo, sangue, saliva, pele, enfim, tudo que contenha células vivas. Tendo este DNA em mãos, inicia-se o PCR. Em tubos próprios, depositamos o DNA e os reagentes necessários para que a reação ocorra. Estes reagentes são uma enzima conhecida como Taq DNA polimerase, um tampão para que esta enzima atue em seu pH ótimo, nucleotídeos livres para que novas moléculas de DNA possam ser produzidas e marcadores conhecidos como primers. Estes primers vão possibilitar que se produzam cópias somente da região (ou regiões) de interesse do DNA. Através de alterações de temperatura realizadas por equipamentos conhecidos como termocicladores, os reagentes e o DNA vão se combinar e formar cada vez mais novas moléculas de DNA.
Terminada esta primeira fase, o produto desta reação é aplicado em um gel de agarose, que se parece com uma gelatina. Através deste gel é possível visualizar o que se produziu na etapa anterior, ou seja, neste gel é que encontramos, por exemplo, o sexo de um animal.
As técnicas utilizadas nos processos laboratoriais são as mais modernas que existem na área da Biologia Molecular. Desenvolvido como uma alternativa segura quando comparado à sexagem cirúrgica, o processo de sexagem através do DNA tem sido utilizado desde o seu desenvolvimento com uma precisão superior a 99%.
A sexagem pelo DNA baseia-se na técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction – Reação em Cadeia pela Polimerase) para visualizar pedaços de DNA dos cromossomos sexuais de cada ave. O sexo aviário é determinado cromossomicamente. As aves fêmeas são heterozigóticas (WZ) e os machos são homozigóticos (ZZ). O gene CHD é encontrado tanto no cromossomo W como no Z, CHD-W e CHD-Z.
| |
|
Embora o DNA codificante seja conservado, os comprimentos dos DNA's não-codificantes diferem entre si. Utilizando um único par de primers CHD, a enzima do PCR duplica esses segmentos de DNA milhões de vezes até poderem ser fotografados em equipamento especial. Como os tamanhos dos dois produtos de PCR do W e Z CHD são diferentes, machos e fêmeas são facilmente identificados. Assim a fêmea, que possui os dois cromossomos W e Z, terá dois tamanhos diferentes de bandas; enquanto que o macho, possuindo 2 cromossomos Z, terá uma única banda.
Os produtos de PCR de uma amostra de ave são comparados com o DNA de uma ave de sexo determinado para se obter os resultados. A EJBio utiliza procedimentos operacionais laboratoriais meticulosos para assegurar a mais alta precisão possível.
Página inicial, clique aqui.
